BMC Oral Health：刷牙、牙线和漱口对龈上和龈下菌斑微生物群的影响

牙菌斑生物膜内微生物群落结构的变化是龋齿和牙周炎等常见口腔疾病的主要病因。除了刷牙，控制牙菌斑生物膜依赖于各种辅助方法，包括牙线和漱口。尽管有效性证据有限，但牙线一直是牙科专业人员长期推荐的机械清除近端间牙菌斑的方法。在Worthington等人进行的一项系统综述和荟萃分析中，有“低确定性证据”表明，“除刷牙外，使用牙线可以在一个月内减少牙龈炎(以牙龈指数(GI)衡量)(SMD -0.58, 95%置信区间(CI)‐1.12至‐0.04;8项试验，585名参与者)，三个月或六个月。出血部位和斑块比例的结果也不一致(非常低确定性的证据)。”。

当作为日常机械口腔卫生的辅助工具时，含有四种精油(EOs)的固定组合的含酒精漱口水在临床上长期被证明可以减少菌斑、牙龈炎和牙龈出血，并且在最近的两个为期3个月的临床试验中，与牙线相比表现更好。在为期6个月的临床试验中，不含酒精的EO漱口水的效果与含酒精的漱口水相似。含酒精的EO漱口水的抗菌作用一直表明，在各种口腔解剖部位，包括舌头、脸颊和龈下间隙，口腔微生物的减少。这些数据是使用成熟但过时的方法获得的，例如细菌细胞培养枚举法]和检查特定细菌种类的棋盘DNA-DNA杂交法。

最近，利用高通量DNA测序的微生物谱分析的进展揭示了人类口腔中存在700多种细菌。这些新方法能够对口腔微生物组进行非常详细的研究，这对于更充分地了解口腔微生物在各种口腔疾病的发病机制中的作用以及因此潜在的预防至关重要。然而，目前对某些机械和化疗干预如何影响口腔微生物群只有部分了解。描述绝对个体细菌种类丰度、微生物群落的时空发展及其在不同口腔表面的临床相关性的可量化微生物组数据有限。近端间牙菌斑相对不受干扰，细菌多样性更大，包括那些与牙龈炎相关的细菌，比更容易接近的口腔区域。

本临床试验采用一种新的微生物组谱分析方法和vPCR活菌计数方法生成绝对定量微生物组数据，研究了含EOs和不含酒精的固定组合的牙线和漱口水对牙菌斑微生物群的影响。在菌斑标本中加入已知数量的外源对照DNA，以便对细菌细胞数量进行量化。此外，根据已发表的文献证据，根据其临床相关性对物种身份进行了仔细的注释和分类。本试验招募的受试者每天使用一次牙线，每天使用两次漱口水，或同时使用牙线和漱口水，为期12周。这项机制研究首次使用临床相关的微生物指标对口腔护理方案对菌斑微生物组的影响进行了全面量化。

方法：采用单中心、考官盲、虚拟监督、平行组对照的牙龈炎患者临床试验。患有牙龈炎的受试者被随机分为仅刷牙组(B);刷牙和牙线(BF);用李斯特林®清凉薄荷®抗菌剂(BA)刷牙和冲洗;用Listerine®Cool Mint®Zero (BZ)刷牙和冲洗;或用李斯特林®清凉薄荷®零(BFZ)刷牙、用牙线剔牙和冲洗。所有受试者每天用单氟磷酸钠牙膏和软毛牙刷刷牙两次，每次1分钟。使用牙线的受试者每天使用一次无味的上蜡牙线。被分配使用漱口水的受试者每天冲洗两次。在基线访问时以及干预4周和12周后收集斑块标本。细菌细胞数量的定量是通过在提取DNA之前向菌斑样本中加入参考量的DNA对照，然后进行浅鸟枪宏基因组测序来实现的。

研究设计流程图及受试者招募

受试者人口统计学和基线特征

细菌谱摘要显示了在基线时每种分类的物种数量。健康组和牙龈炎组的平均值四舍五入到最接近的整数。p值代表比较健康受试者与牙龈炎受试者的两样本t检验

龈上菌斑的微生物组评估。(a)口腔细菌总丰度在log10 CMU的平均值，(b) Shannon-Weaver多样性指数，(c)观察到的物种丰富度。点代表单个样本。

加权UniFrac主坐标分析显示，经过4周和12周的口腔护理方案后，龈上菌斑微生物组的β -多样性随时间的变化

口腔护理方案对龈上菌斑微生物群的影响。显示了(a)口腔共生、(b)与牙龈炎相关、(c)产生挥发性硫化合物和(d)致酸性细菌种类的平均丰度。误差条表示均值的标准误差。

生存力qPCR结果显示口腔护理方案对口腔细菌总数的影响，并选择指示菌种。图中显示了(a)龈上菌斑和(b)龈下菌斑的log10丰度平均值。点代表单个样本。

结果：286例受试者完成试验。牙龈上菌斑的元基因组数据显示，与B组相比，4周和12周后，BA、BZ和BFZ组的Shannon-Weaver多样性、物种丰富度、总细菌丰度和分类细菌丰度(共生、牙龈炎和恶臭)显著降低，而B组和BF组之间没有显著差异。龈上菌斑vPCR进一步验证了这些结果，龈下菌斑vPCR仅对BFZ干预有效。

结论：本研究报道了在临床试验中成功应用微生物组定量分析方法，证明与机械方法相比，精油漱口剂在控制牙菌斑方面具有持续和优越的功效。本试验中的定量微生物学数据也加强了EO漱口水对牙菌斑微生物生态的安全性和作用机制，并强调了将EO漱口作为口腔卫生养生不可或缺的一部分的重要性。

原始出处：

Kyungrok, Min;  Mary Lynn, Bosma;  Gabriella, John; Quantitative analysis of the effects of brushing, flossing, and mouthrinsing on supragingival and subgingival plaque microbiota: 12-week clinical trial.BMC Oral Health 2024 May 17;24(1):575